[일반생물학실험]항생제의 항균 활성 측정 2부

실험 기구 및 시약

1. 실험 시약

1) LB 배지

LB는 일반영양배지의 이름이다. (Luria Bertani의 약자)

① Plate : 평판배지, 일반적으로 많이 사용하는 배지, 고체로 이루어져있으며 일반 액체배지에 agar를 넣어 굳히면 고체배지가 된다. 균주의 싱글콜로니를 얻기 위하여 또는 희석평판배양법, 균주확인실험 등 싱글콜로니를 확인 할 수 있는 배지이다.

② Slant : 사면배지, 사면배지는 plate와 똑같이 고체배지로 이루어져있지만 다른 점은 테스트 튜브 같은 긴 유리튜브에 넣어서 기울여 만든 것이다. 생화학적테스트에서 많이 사용된다. 배지의 층이 plate와 달리 두껍기 때문에 균주를 더 오래 보관할 수도 있고, 혐기적인 상태의 생화학적테스트도 가능하다.

③ Broth : 액체배지, 일반적으로 균주를 대량 배양할 때 사용한다. 일반적으로 고체배지에 agar를 제외하면 액체배지가 되는 것이다. 일부 특수배지에는 Agar가 미리 들어있는 것도 있다.

 

2) Kanamycin

방선균이 생산하는 아미노글리코시드계 항생물질의 하나이다. 그람양성균, 음성균, 결핵균 등에 살균적으로 작용하지만 혐기성 균에는 효과가 없다. 청력·평형각장애, 신장애 등의 부작용을 일으킨다. 작용기작은 단백질합성의 저해가 주이다.

백색 또는 황색을 띤 분말로 물에 녹고 비교적 안정하여 주사에나 내복에도 사용한다. 세균성 질환에 사용하는 화학요법제인데 가벼운 귀울음 등의 부작용이 있다.

실험 방법

1. 균주 배양

1) 준비해온 식품 sample을 멸균된 증류수 50ml에 섞어 놓는다.

2) sample 100㎕ 고체배지에 spreading

3) sample 10㎕과 멸균된 증류수 90㎕를 넣고 고체배지에 spreading

4) 37℃에서 incubation

2. 실험 과정

1) 각각 Ampicillin과 Kanamycin이 들어있는 LBA 배지와 LBK 배지를 준비한다.

2) 각각의 배지에 지난 시간에 배양한 균주를 도말한다.

3) 두 배지 모두 평면 도말(spreading) 해준다.

4) 새로운 LBK 배지에 하나의 colony를 따기 위해서 획선 도말(streaking) 해준다

Isolating single colonies by spreading liquid aliqiots of cell culture.

실험 결과

1. 결과 처리

1) Streaking

엠피실린 처리를 한 왼쪽 배지와 카나마이신 처리를 한 오른쪽 배지에 카나마이신에 저항하는 유전자가 있는 세균을 배양해 보았더니 왼쪽 배지에서는 세균이 죽어 콜로니를 형성하지 않았고 오른쪽 배지에서는 세균이 죽지 않아 콜로니를 형성하였다.

2) Spreading

왼쪽 배지에는 희석하지 않은 세균을 배양하였고 오른쪽 배지에는 1/100으로 희석한 세균을 배양했더니 왼쪽 배지에는 많은 콜로니를 관찰할 수 있었고 오른쪽 배지에는 비교적 적은 콜로니를 관찰할 수 있었다.

카나마이신 저항 유전자를 가진 세균이 카나마이신 처리를 한 배지에서 죽지 않았다. 그러나 엠피실린 처리를 한 배지에서 죽은 것을 관찰할 수 있었다. 이를 통해 엠피실린에 저항하는 유전자를 가진 세균을 엠피실린 처리를 한 배지에 배양한다면 죽지 않을 것이라고 예상된다.

Streaking을 하는 과정에서 겹쳐서 문지르는 바람에 예상했던 결과와 다른 결과가 나왔고 그 결과가 뚜렷하게 관찰되지 않았다.

 

참고 문헌

1. 일반 생물학 , 김준호 지음, 향문사, 2005.01

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