[생명과학실험]미생물 효소 활성 검사(API ZYM)

실험 이론 및 원리

1. 실험 배경

API ZYM은 미생물의 효소활성을 검사하기 위해 제작된 키트로서 적은 시료양으로 19가지 효소의 활성을 빠르고 조 직적으로 검사할수 있다. API ZYM kit는 20가지의 작은 well로 구성되어있으며 각 well에는 효소반응을 검사할 수 있는 불용성기질 (substrate)과 완충액이* 들어있어서 효소와 기질 사이에 반응을 용이하게 한다. 미생물이 가지고 있는 효소가 정제되지 않은 상태에서도 효소의 활성을 검사할 수 있도록 제작되었다. 따라서 효소들의 활성 스펙트럼을 더욱 쉽게 제공할 수 있다.

* 완충액의 역할 : 세포가 살 수 있는 환경을 만들어준다. 예를 들어 세포가 살 수 있는 pH환경을 조성하여서 세포가 터 지거나 죽지 않게 한다.

실험 방법

1. 스트립의 리딩(그 전 단계는 생략)

1) 시약들은 사용하기 전에 미리 실온에 꺼내 둔다.(20-30℃)

2) ZYM A와 ZYM B 시약을 각각의 큐플에 한 방울씩 떨군다.

3) 5분간 기다린 후 결과를 판독한다. 그 후 반응결과를 결과지에 기록한다.

V=violet / O=orange / B=blue / C=colorless / BR=brown

 

실험 결과

1. 실험 분석

N=cuple의 숫자                          결=ZYM kit결과 판정

양=원래 양성일 때 결과                  판=실제 실험결과 색깔

N

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

결

x

+

-

-

-

+

+

-

+

-

-

+

-

-

-

-

-

+

-

-

양

x

V

V

V

V

O

O

O

O

O

V

V

V

B

V

V

BR

V

V

판

x

V

V2

V2

C

O

O

O2

O4

C

V2

V

C

C

C

C

V1

BR

C

C

violet 2번 cuple, orange 6번 cuple 색깔을 기준으로 1~5로 나눔. (표에 있는 V2는 violet 2번 cuple기준 2정도의 색도를 뜻하고,1→5로 갈수록 색깔이 진해진 것을 나타낸다.)

이때 1~2까지의 색도는 음성으로, 3~5까지의 색도는 양성으로 판정하였고 그 결과 3,4번 cuple은 2번의 바이올렛색깔을 기준으로 2정도의 색깔을 나타내었기 때문에 상대적으로 음성이다. 8번 cuple의 경우에도 6번과 비교하였을 때 상대적으로 오렌지2정도의 색깔을 나타내었기 때문에 음성으로 판정하였다. 13~16번과 19~20번 cuple은 음성을 뜻하는 Colorless or Very pale Yellow를 나타냈기 때문에 음성임을 알 수 있다.