[Purification of DNA from Living Cells] Total cell DNA의 분리 - 3부

DNA 농도의 측정

measured by ultraviolet(UV) absorbance spectrophotometry

1. 양 : A260 = 1 → 50㎍ ds DNA/㎖

2. 순도 중요 : A260/A280(protein) 측정 비교한다. 비율이 1.8이상이면 순도 높고, 이하이면 순도 낮은 것이며 불순물이 많은 경우 페놀 처리부터 다시 한다.

세균 이외의 생물체로부터의 total cell DNA의 분리

실험 목적상 세균 이외의 생물체로부터 total cell DNA를 분리할 필요가 있다. 물론 세균에서의 경우와 동일하지 않으며, 차이점은 다음과 같다.

1. 세포 파괴 단계에서 차이점

1) 식물 세포 : lysozyme이 효과가 없기 때문에 물리적 방법(냉동시킨 시료를 갈아서 부수는 등)을 사용하거나, cellulase[셀룰로스(식물 세포벽의 구성성분) 분해효소]를 사용하여 세포벽 파괴

2) 동물 세포 : 세포벽이 없기 때문에 detergent 처리만으로 쉽게 용해시킬 수 있음.

2. 세포 추출물 내용물의 차이

1) 세균 : 주로 단백질, DNA, RNA

2) 식물 : 단백질, DNA, RNA 외에 다량의 탄수화물(광합성의 결과) 존재

① 탄수화물 제거를 위한 제 1 방법

∘ CTAB(CetylTrimethylAmmonium Bromide)라는 detergent 처리

② 탄수화물 제거를 위한 제2 방법

∘ 음이온 교환 크로마토그래피(anion-exchange chromatography) : 핵산(nucleic acid)이 음전하를 띠는 성질을 이용.

CTAB(CetylTrimethylAmmonium Bromide)               Anion-exchange chromatography

Fig. 1 The eTAB method for purification of plant DNA

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