[미생물실험]세균의 염색 및 현미경 관찰

실험 목적

세균의 단순염색 방법을 배우고 광학현미경을 통하여 세균 세포들의 배열을 관찰하기 위함이다.

 

실험 이론 및 원리

1. 염색을하는 이유

광학현미경으로 살아있는 생물체를 염색하지 않은 상태로 관찰하는 것은 어려운 일이다. 세균은 매우 작아서 대물렌즈를 이용하더라도 관찰하기 어렵다. 이 문제를 최소화하여 광학현미경에 의한 관찰을 용이하게 하기 위하여 세균을 염색하는 것이다.

 

2. 단일 염색법

미생물학에서 사용되는 생물학적 염료는 발색단을 포함하는 약 유기산의 염이다. 만약 발색단이 양전하(양이온)를 띄게 되면 그것은 염기성 염료이고, methylene blue, crystal violet, 그리고 safranin과 같은 염기성 염료들은 일반적으로 세균세포들을 염색하는데 사용된다.

세균세포들이 염색되면 크기, 형태, 그리고 세포의 배열같은 특징들이 쉽게 식별된다. 대부분의 세균은 0.2㎛부터 5㎛, 또는 그 이상의 크기를 나타낸다. 태부분의 세균세포에서 나타나는 모양은 구형, 막대모양, 나선형이다. 세균은 형태학적으로 여러 가지 종류를 나타내고 있을 뿐만 아니라 세포의 배열에서도 다양함을 보여준다.

 

 

실험 기구 및 시약

1. 실험 재료

Slide glass, cover glass, 살균수, 백금이, 알코올램프, 스포이드, Methylene blue 염색시약

광학 현미경

실험 방법

1. 실험 과정

1) Slide glass 살균수 1방울을 떨어뜨린다.

2) 균을 벽금이 취하여 살균수 위에 고르게 편다.

3) 실온에서 건조시킨다.

4) 도말면 위로 가게 하여 불꽃위에 3번정도 고정시킨다. (균의 고정)

5) Methylene blue 염색시약 1～2방울 떨어뜨려 염색시킨다.(1～2분정도)

6) 약하게 흐르는 수돗물로 Slide glass 뒷면에 대고 염색약이 씻겨 내려갈 때까지 서서히 씻는다.

7) 수세한 표본을 실온에서 건조시킨다.

8) Caver glass로 덮고 현미경으로 관찰한다.

미생물 염색하기(단순염색) : 도안 - 건조 - 고정 - 염색 - 수세 - 건조 - 검경

실험 결과 및 토의

1. 결과 분석

막대기 모양이나 둥근모양의 균이 보인다. 그러므로 슈도모나스는 막대세균이나 구균이다.

 

2. 실험 고찰

배지를 만들어 배양했던 세균을 염색하는 시간을 가졌다. 지난번엔 균을 백금이에 묻히는 과정에서 너무 많이 묻혔었기 때문에 이번에는 소량만 묻히도록 하였다. 세균을 염색하는 과정은 순탄했지만 현미경으로 관찰할 때는 어려웠다. 현미경의 초점이 맞지 않아 처음에는 균이 슬라이드 글라스에 옮겨지지 않았다고 생각했는데 몇 번의 시행착오 끝에 균을 찾아낼 수 있었다.

참고 문헌

1. 일반미생물학실습, 학문사, 이건섭, p.36, 40, 57