[미생물학실험]생화학적 검사를 통한 Staphylococcus spp.의 분리동정 3부






실험 재료 및 방법


1. 당 발효 (Carbohydrate Fermentation)

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-glucoe-phenol red 배지

-mannitol-phenol red 배지

-백금이 또는 백금선

-인큐베이터

-알코올램프


(2) 실험 방법

① 멸균시킨 백금이를 식힌 후 균주를 채취한 다음 glucoe 및 mannitol phenol red 배지에 접종했다.

② 37℃에서 24시간 동안 incubation시켰다.

③ 색깔 변화를 관찰했다.

 

2. Catalase 생산

(1) 실험재료

-미지의 균주

-과산화수소 ( H2O2)

-슬라이드

-스포이드

-백금이

-알코올램프

-알코올 솜

 

 


(2) 실험 방법

① 알코올 솜으로 슬라이드를 닥았다.

② 멸균시킨 백금이를 식힌 후 균주를 채취한 다음 슬라이드에 묻혔다.

③ 슬라이드 위에 과산화수소(H2O2)를 가한 후 기포생성 여부를 관찰했다.

 

3. Oxidase 생산

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-여과지

-슬라이드

-oxidase 검정시약: dimethyl-p-phenylenediamine

-알코올 솜

-스포이드

-백금이

-알코올램프


(2) 실험 방법

① 알코올 솜으로 슬라이드를 닦았다.

② 슬라이드 위에 여과지를 올려놓은 후, oxidase 검정시약(dimethyl-p-phenylenediamine)을 한 방울 가했다.

③ 멸균시킨 백금이를 식힌 후 균주를 채취한 다음 그 위에 묻혔다.

④ 색깔 변화를 관찰했다.

 

4. 아미노산의 decarboxylase 검사

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-백금이 또는 백금선

-알코올 램프

-플라스틱 시험관 2: arginine 첨가배지, 첨가되지 않은 배지

-인큐베이터

-mineral oil

-피펫


(2) 실험 방법

① Arginine이 첨가된 배지와 첨가되지 않은 배지를 준비하였다.

② 멸균한 백금이를 식힌 후 균주를 채취하여 배지에 접종했다.

③ 그 위에 mineral oil 20㎖를 가하였다..

④ 37℃에서 24시간 동안 incubation시킨 뒤 색깔 변화를 관찰했다.

 

5. DNase 시험 (deoxyribonuclease test)

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-DNase agar media

-1N HCl

-백금이 또는 백금선

-알코올 램프

-인큐베이터


(2) 실험 방법

① 멸균한 백금이를 식힌 후 균주를 채취하여 DNase agar에 획선으로 접종했다.

② 37℃에서 24시간 동안 incubation시킨 후 1N HCl을 가하였다.

③ 접종부위의 투명여부를 관찰했다.


6. Hemolysis test

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-blood agar media

-백금이 또는 백금선

-알코올 램프

-인큐베이터

 


(2) 실험 방법

① 멸균 후 식힌 백금이로 균주를 채취하여 혈액 배지에 도말평판하였다.

② 37℃에서 24시간 동안 incubation시킨 뒤 용혈성을 관찰하였다.

 

7. 운동성(motility) 판별 & 황화수소(hydrogensuleide, H2S) test

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-SIM 배지

-백금선

-알코올 램프

-인큐베이터

 


(2) 실험 방법

① 멸균 후 식힌 백금이로 균주를 채취하여 SIM 배지에 천자접종하였다.

② 37℃에서 24시간 동안 incubation시킨 뒤 운동성 및 H2S 생성여부를 관찰하였다.

 

8. NaCl test

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-10% NaCl이 담긴 broth 배지

-15% NaCl이 담긴 broth 배지

-알코올 램프

-인큐베이터

-백금이 또는 백금선


(2) 실험 방법

① 멸균 후 식힌 백금이로 균주를 채취하여 10% NaCl이 담긴 broth 배지 및 15% NaCl이 담긴 broth 배지에 접종하였다.

② 37℃에서 24시간 동안 incubation시킨 뒤 배지의 혼탁도를 살펴 균의 생존여부를 판단했다.

 

9. voges-proskauer 반응 (VP reaction)

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-MR-VP 배지

-Barritt's 시약 A, B

-알코올 램프

-인큐베이터

-백금이



(2) 실험 방법

① 멸균 후 식힌 백금이로 균주를 채취하여 MR-VP 배지에 천자접종하였다.

② 37℃에서 24시간 동안 incubation시킨 뒤 Barritt's 시약A를 6방울, B를 2방울 가하였다.

③ 결과를 관찰하였다.

 

10. bile esculin(aesculin) 시험

(1) 실험 재료

-미지의 균주

-esculin 배지(사면배지)

-백금이 또는 백금선

-알코올 램프

-인큐베이터

 


(2) 실험 방법

① 멸균 후 식힌 백금이로 균주를 채취하여 esculin 배지의 사면에 streaking했다.

② 37℃에서 24시간 동안 incubation시킨 뒤 색깔 변화를 관찰했다.

 





Reactions





댓글 쓰기

0 댓글